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三种不同引物扩增对猪圆环病毒2型检测敏感性的研究

时间:2018-08-02 13:17来源:毕业论文
为快速检测疫苗产品中的外源猪圆环病毒2型(PCV2),针对其ORF2基因设计一对引物Y1/Y2进行PCR检测,并从其特异性、敏感性等方面与PCV国家标准引物(P1/P2/P3)和PCV出入境引物(nP1/nP2/n

摘要:为快速检测疫苗产品中的外源猪圆环病毒2型(PCV2),针对其ORF2基因设计一对引物Y1/Y2进行PCR检测,并从其特异性、敏感性等方面与PCV国家标准引物(P1/P2/P3)和PCV出入境引物(nP1/nP2/nP3/nP4)进行比较。结果显示:三种引物均具有很高的特异性;用大北农株(DBN-SX07)验证三种引物的检测敏感度,引物Y1/ Y2最高检测敏感度为0.19TCID50,引物P1/ P2/ P3最高检测敏感度为0.079 TCID50,引物nP1/ nP2/ nP3/ nP4最高检测敏感度为7.9 TCID50;临床株验证时,引物Y1/ Y2最高检测敏感度为1.58×10-6TCID50,引物P1/ P2/ P3最高检测敏感度为1.58×10-4TCID50,,引物nP1/ nP2/ nP3/ nP4最高检测敏感度为1.58×10-4TCID50;在高稀释度时,出入境引物检验结果判定总是出现混乱,存在一定缺陷。结果表明,引物Y1/Y2检测PCV2敏感性更高,更适于本公司质检部门进行疫苗产品的外源PCV2检测。26601
重庆时时彩的规律关键词:猪圆环病毒2型;不同引物;PCR;敏感性
Comparative    study on the sensitivity of three kinds of different primers for the detection of Porcine circovirus type 2
Abstract:In order to detect exogenous porcine circovirus type 2 (PCV2) in vaccine products rapidly, we designed a pair of primers Y1 and Y2 on the basis of the ORF2 gene for PCR detection,and compared its specificity, sensitivity with PCV national standard primers (P1/P2/P3) and entry-exit inspection primer. The results showed that (1) Three kinds of primers had high specificity for the detection of PCV2; (2) When the DBN-SX07 strain was detected , the PCRs using primers Y1/Y2 and P1/P2/P3 were able to detect at least 0.079TCID50 PCV2, while the nest-PCR primers nP1/nP2/nP3/nP4 could detect only 7.9 TCID50 ; (3) When the clinically acquired strain was been detected, the PCR using primers Y1/Y2 was able to detect at least 1.58×10-6TCID50 PCV2, while the primers P1/P2/P3 and nP1/nP2/nP3/nP4 could detect only 1.58×10-4TCID50. (4) When the virous titer is high, the results of the nest-PCR primers nP1/nP2/nP3/nP4 are always confused. Consequently, the primers Y1/Y2 had higher sensitivity for the detection of PCV2, and it was more suitable for the detection of exogenous PCV2 in vaccine products. 源自:六]维~论(文`网.加7位QQ3249`114 重庆时时彩的规律 www.mamitama.com
Key words: PCV2; Different primers; PCR; specificity
  目  录

摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1材料 2
  1.1.1主要仪器 2
  1.1.2 细胞和病毒 2
  1.1.3酶和试剂 2
  1.1.4引物 2
1.2方法 3
  1.2.1 供试病毒TCID50的测定3
  1.2.2 病毒DNA的提取 3
  1.2.3 PCR检测3
  1.2.4琼脂糖凝胶电泳5
  1.2.5特异性和敏感性分析5
  1.2.6重复性分析5
2 结果5
2.1毒株的TCID505
2.2特异性分析6
2.3敏感性分析7
2.4重复性分析8
3 讨论 8
致谢8
参考文献9
附录10
三种不同引物扩增对猪圆环病毒2型检测敏感性的研究
猪圆环病毒(PCV)是目前世界上体积最小、无囊膜的单链DNA病毒,现已知猪圆环病毒有两个基因型:PCV1和PCV2,其中PCV1没有致病性,只有PCV2具有致病性。PCV2现在被认为是仔猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,此外,它还与母猪流产、仔猪先天性震颤(CT)、育肥猪的慢性呼吸道病综合征(PRDC)和猪皮炎和肾病综合症(PDNS)等疾病有关[1]。因此,PCV2感染会给养猪业造成严重的经济损失。
在疫苗生产中,由于所用原材料均来源于动物,存在外源病毒污染的风险。猪圆环病毒是疫苗制备中可能出现的外源病毒之一,2010年便出现过一次外源PCV污染轮状病毒疫苗事件[2],影响较大。因此,疫苗尤其是减毒活疫苗的生产中对PCV2的检测极为重要。检测外源病毒时,最常用的检测手段是PCR,现在我国已将检测猪圆环病毒的PCR方法列为国家标准。 三种不同引物扩增对猪圆环病毒2型检测敏感性的研究:/a/yixue/20180802/20834.html
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